二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂，在深低温（零下200度）保存细胞时冻存过程中，为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤，有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。

　　DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。

　　深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制，复苏时动作要快，尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成对细胞严重的毒性。

　　二甲基亚砜（DMSO）是最/好的细胞冻存保护剂，但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂，研究结果表明，培养液中DMSO浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1‰浓度时抑制率为35%，即使是0.04‰的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响。

　　在实验过程中具体该如何使用呢？接下来就告诉你

　　01细胞冻存

　　①配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液。

　　②取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

　　③去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来。

　　④离心1000rpm，5min。

　　⑤去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml。

　　⑥将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml。

　　⑦在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。

　　⑧冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

　　02细胞复苏

　　①从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

　　②从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀。

　　③离心，1000rpm，5min。

　　④弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。

　　⑤次日更换一次培养液，继续培养。

　　以上就是DMSO

　　在细胞冻存中的使用方法

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