试剂的取用方法:
1.固体试剂的取用方法
固体试剂一般用牛角匙或塑料匙取用,牛角匙或塑料匙的两端分别为大小两个匙,且随匙柄的长度不同,匙的大小也随着变化,长的匙大,短的匙小。
取用试剂时,牛角匙或塑料匙必须洗净擦干才能用,以免沾污试剂。最好每种试剂设置一个专用牛角匙或塑料匙。
取用试剂时,一般是用多少取多少,取好后立即把瓶盖盖严,需要蜡封的,必须立即重新蜡封,随手将试剂瓶放回原处,以免搞错位置被人误用或因查找而造成时间浪费。
若要求称取一定量的固体试剂时,可先在台秤盘上放纸或表面皿,使台秤平衡,然后将固体试剂放在纸上或表面皿上称量。易潮解或有腐蚀性的物质可将纸改成用烧杯或锥形瓶称量。若要求准确称取一定重量的固体试剂作基准物或配制溶液,一般采用减量法或固定重量法在分析天平上称量。
固定重量法适用于不吸水,在空气中性质稳定的试剂,如纯锌屑、铜屑等。
其操作方法如下:先称容器(如小表面皿、小烧杯、铝箔、硫酸纸等)的质量,然后将砝码或指数盘加到指定的称量,用食指轻轻地振动牛角匙,使试剂缓慢地撒入容器,直至平衡点与称容器时一致,停止撒入。
减量法适用于易吸水、易氧化还原、易与二氧化碳反应的试剂,如无水碳酸钠、各类固体基准物等。其操作方法如下:将试剂装入称量瓶中,称取试剂加称量瓶的总重量W(精确至0.1mg),用纸条裹着称量瓶从天平中取出(切勿用手,因手中有汗与油脂会沾污称量瓶,引起误差),将它举在烧杯上方,用纸条夹住瓶盖头子,打开瓶盖(切勿用手),使称量瓶倾斜,用盖轻轻敲打瓶口上部,使试剂缓慢地落于烧杯中。当倒出的试剂量差不多达到称量要求时,将称量瓶慢慢立起,并用瓶盖轻敲瓶口,使粘在瓶口的试剂落入瓶中,盖好盖子,放进天平称量,得W1,则倒出的试剂重量W试=W-W1。若W试量少于要求量,可重复上述操作,直至W试达到要求的范围为止。敲打切勿一下倒出很多,这样易发生超量,超量后,就需废掉,重新称量。
1.量筒的使用
量筒是用来量取液体体积的仪器,根据不同的需要,选用不同容量的量筒,读数时应使眼睛的视线和量筒内液体弯月面的最低点保持水平,偏高或偏低都会造成误差。
2.移液管的使用
要求准确地移取一定体积的液体时,可以使用移液管,使用前应先用洗液、自来水、蒸馏水洗至内壁不挂水珠。然后用少量被量取的液体洗三遍。吸取液体时,右手拇指及中指拿住移液管的上端标线以上部位,使管下端伸入液面下约1厘米,左手拿吸耳球慢慢吸上液体,管子则随着容器中液体液面的下降而往下伸。当管中液体上升到刻度标线以上时,左手移开吸耳球,右手迅速用食指堵住管口。然后使管子下端离开液体,靠在容器壁上,稍微放松食指,同时轻轻转动移液管。
要知道,化学试剂的存放与取用要求万万马虎不得,实验室所用试剂,很多都是易燃易爆、有腐蚀性或有毒的。因此在使用时,一定严格遵守有关规定,以保证安全。
移液器的密封性主要有几个因素
1、活塞的品质活塞的材质很重要,要经得起长期与套筒相互摩擦
2、套筒的品质不能容易弯曲变形或热胀冷缩
3、O型弹性密封圈这个是耗材,一定要定期检查更换,否则很容易漏气导致失准
4、Tip和枪尖的密合度这个还关系到Tip的质量和设计
5、真空润滑脂一旦有液体意外进入移液器需要在清理后补润滑脂,通常校准的时候厂家会补
移液器的调节机构是否准确是仅次于密封性的因素。不同的厂家有不同厂家的专利技术,不好的移液器就需要频繁校准。
移液枪使用注意事项
移液枪虽然简单,但要使用好也并不容易,有许多点注意并不常引起人们的关注,但可能会潜移默化的影响它的精度。
1、每次使用完后尽量调回最大量程,这样可以使弹簧得到自然地伸长,有利于弹簧寿命的提高。
2、使用移液枪时,如果是从大到小转换量程,顺时针调到需要的示数即可,但如果是从小到大,逆时针旋转最好超过些你需要的量程,再顺时针调到你需要的示数,这样做可以使弹簧得到最大程度的伸长,往往顺时针旋转有利于移液枪寿命的延长。
3、移液枪自然要在规定的量程内使用,否则会造成内部的机械装置卡住而影响精度。
4、移取液体需要分情况采用不同方法:
对于一般的常规液体:常规液体:将按钮压至第一停点位置。将移液器滴头置于液面以下并慢慢松开按钮,待滴头吸入溶液后,将滴头撤出液面并斜贴在试剂瓶壁上流淌走多余的液体。将移液器移至需要加到的位置,轻轻压下操作按钮至第一停点位置。再继续向下压至第二停点,以排尽滴头内的液体。
对于粘稠状液体、易起泡沫液体:极微量液体或不更换滴头的重复操作时,将按钮下压至第二停点处,将移液器滴头置于试剂液面以下,然后慢慢松开按钮吸液。待滴头吸满液体后,将滴头撤出液面并斜贴在试剂瓶壁上淌走多余的液体,将移液器移至需要加样的位置,轻轻压下操作按钮至第一停点位置,放出预设定的液体。
5、为了提高精确度,可以预洗一下。使得移液枪内部管壁的表面张力达到饱和,不影响移液。
6、慢吸慢放,控制好弹簧的伸缩速度。吸液速度太快会产生反冲和气泡,导致移液体积不准确。
7、移液枪不得移取有腐蚀性的溶液,如强酸、强碱等。附校正水的密度随温度的变化。
2.液体试剂取用法:
1)从滴瓶中取用试剂
从滴瓶中取试剂时,应先提起滴管离开液面,捏瘪胶帽后赶出空气,再插入溶液中吸取试剂。滴加溶液时滴管要垂直,这样滴入液滴的体积才能准确;滴管口应距接收容器口(如试管口)半厘米左右,以免与器壁接触沾染其它试剂,使滴瓶内试剂受到污染。如要从滴瓶取出较多溶液时,可直接倾倒。先排除滴管内的液体,然后把滴管夹在食指和中指间倒出所需量的试剂。滴管不能倒持,以防试剂腐蚀胶帽使试剂变质。不能用自己的滴管取公用试剂,如试剂瓶不带滴管又需取少量试剂,则可把试剂按需要量倒入小试管中,再用自己的滴管取用。
2)从细口瓶中取用试剂
从细口瓶中取用试剂时,要用倾注法取用。先将瓶塞反放在桌面上,倾倒时瓶上的标签要朝向手心,以免瓶口残留的少量液体顺瓶壁流下而腐蚀标签。瓶口靠紧容器,使倒出的试剂沿玻璃棒或器壁流下。倒出需要量后,慢慢竖起试剂瓶,使流出的试剂都流入容器中,一旦有试剂流到瓶外,要立即擦净。切记不允许试剂沾染标签。
3)取试剂的量
在试管实验中经常要取“少量”溶液,这是一种估计体积,对常量实验是指0.5~1.0mL,对微型实验一般指3~5滴,根据实验的要求灵活掌握。要会估计1mL溶液在试管中占的体积和由滴管加的滴数相当的毫升数。要准确量取溶液,则根据准确度和量的要求,可选用量筒、移液管或滴定管。
用倾注法取液体操作
打开试剂瓶盖,反放于桌上,以免瓶塞沾污造成试剂级别下降。用右手手掌对着标签握住试剂瓶,左手拿玻璃棒,使棒的下端紧靠容器内壁,将瓶口靠在玻璃棒上,缓慢地竖起试剂瓶,使液体试剂成细流沿着玻棒流入容器内。试剂瓶切勿竖得太快,否则易造成液体试剂不是沿着玻棒流下而冲到容器外或桌上,造成浪费,有时还有危险。易挥发嗅味的液体试剂(如浓HCl),应在通风橱内进行。易燃烧、易挥发的物质(如乙醚等)应在周围无火种的地方移取。若是进行实验的器皿,一般液体试剂的加入量不得超过容器的2/3容积。试管实验,最好不要超过1/2容积。
少量试剂的取用法:
首先用倾注法将试剂转入滴瓶中,然后以滴管滴加,一般滴管每滴约0.05mL左右。若要精确数,可先将滴管每滴体积加以校正,用滴管滴20滴于50mL干量筒中,读出体积,算出每滴体积数。
用滴管加入液体试剂时,滴管可垂直或倾斜滴加,且滴管不能与器壁相碰,以免滴管沾污(滴管垂直或倾斜都可)。
当实验无须准确量取液体试剂时,可根据反应容器的容积数来估计,无须用量筒等度量仪器。若实验要求精确加量,必须用量筒或移液管进行,具体操作见“液体体积的度量仪器”一节。必须注意一点,任何试剂取出后,不得返入试剂瓶中,以免试剂沾污而降级。
附:实验室毒性最大的17种试剂:
1: DMSO
DMSO是二甲基亚砜,用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性,有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。
DMSO也是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。
但是研究表明,DMSO存在严重的毒性作用,与蛋白质疏水集团发生作用,导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性。
DMSO是毒性比较强的东西,用的时候要避免其挥发,要准备1%-5%的氨水备用,皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤.最为常见的为恶心、呕吐、皮疹及在皮肤、和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味。
吸入:高挥发浓度可能导致头痛,晕眩和镇静。
皮肤:能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感,如同所见的皮疹及水泡一样。若二甲基亚砜与含水的皮肤接触会产生热反应。要避免接触含有毒性原料或物质的二甲基亚砜溶液,因其毒性不为人所知,而二甲基亚砜却可能会渗入肌肤,在一定条件下会将有毒物质代入肌肤。吸收:吸收危险性很低。
2: EB
EB:EB(Ethidiumbromide,溴化乙锭)
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!会在60-70度时蒸发(所以最好不要在胶太热的时候加,或者应该加到液体里,0.5ug/ml,染色半小时)(当EB加得过多时,也可以在室温用水将已染色的凝胶浸泡20min以降低未结合的EB引起的背景荧光)。
溴化乙锭溶液的净化处理:由于溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康。
(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理:
将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml;
加入一倍体积的0.5mol/LKMnO4,混匀,再加入等量的25mol/LHCl,混匀,置室温数小时;
加入一倍体积的2.5mol/LNaOH,混匀并废弃。
(2)EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理:
按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。
3: DEPC
DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。DEPC是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性是最强的,使用时戴口罩。不小心沾到手上注意立即冲洗,RNaseAwayTM试剂可以替代DEPC,操作简单,价格低,且无毒性。只需将RNaseAwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面,浸泡后用水冲洗去除,即可以快速去除器皿表面的RNase,并且不会残留而干扰后继实验。
4: 丙烯酰胺
属中等毒性物质,可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体,因此,在搬运和使用中必须穿戴好防护用具,如防毒服,防毒口罩及防毒手套等。丙烯酰胺的危害主要是引起神经毒性,同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化,试验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物,职业接触人群的流行病学观察表明,长期低剂量接触丙烯酰胺会出现嗜睡、情绪和记忆改变、幻觉和震颤等症状,伴随末梢神经病如手套样感觉、出汗和肌肉无力。累积毒性,不容易排毒。
具备以下任何一项者,可列为慢性丙烯酰胺中毒观察对象。
a.接触丙烯酰胺的局部皮肤出现多汗、湿冷、脱皮、红斑;
b.出现肢端麻木、刺痛、下肢乏力、嗜睡等症状;
c.神经-肌电图显示有可疑神经源性损害。
5: NN-亚甲双丙烯酰胺
有毒,影响中枢神经系统,切勿吸入粉末。
6: DTT
二硫苏糖醇
很强的还原剂,散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时,戴手套和护目镜,在通风橱中操作。
7: TEMED
强神经毒性,防止误吸,操作时快速,存放时密封。
8: PMSF
苯甲基磺酰氟[(PMSF),C7H7FO2S或C6H5CH2SO2F]是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下,要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤,已污染的工作服丢弃掉。
9: CHCl3
氯仿(CHCl3):
对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一种致癌剂,可损害肝和肾。它也易挥发,避免吸入挥发的气体。操作时戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。
10: HCOH
甲醛(HCOH):
有很大的毒性并易挥发,也是一种致癌剂。很容易通过皮肤吸收,对眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。避免吸入其挥发的气雾。要戴合适的手套和安全眼镜。始终在化学通风橱内进行操作。远离热、火花及明火。
11: Giemsa
吉姆萨(Giemsa):
染料咽下可致命或引起眼睛失明,通过吸入和皮肤吸收是有毒的。其可能的危险是不可逆的效应。戴合适的手套和安全护目镜。在化学通风橱里操作,不要吸入其粉末。
12: NaN3
叠氮钠(NaN3):
毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜,操作时要格外小心。
13: SDS
十二烷基硫酸钠(SDS):
有毒,是一种刺激物,会造成对眼睛的严重损伤的危险。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜。不要吸入其粉末。
14: TCA
三氯乙酸(TCA):
有很强的腐蚀性。戴合适的手套和安全防目镜。
15: TritonX-100
TritonX-100:
引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适的手套和护目镜。
16: (NH4)2S2O8
过硫酸铵[(NH4)2S2O8]:
对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作,操作完后彻底洗手。
17: Trizol
含有毒物质苯酚,如皮肤接触Trizol。请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。如果只是少量接触,并处理后症状减轻,估计问题就不大了。
另外,紫外光或紫外线可损伤眼视网膜。切勿用裸眼和没有防护装置的紫外光源。在实验室里常用的紫外光源包括手提式紫外灯和紫外透射仪。只能通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才能观察。紫外线也是诱变剂和致癌。为使暴露减少到最低限度,确保紫外光源要采用适当防护装置。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手套。