在干细胞冷冻保存过程中，冷冻保护剂（如二甲基亚砜，DMSO）是必不可少的。这些保护剂通过减少细胞内外冰晶的形成，保护细胞结构和功能不受低温损伤。然而，DMSO在复苏后对细胞有一定的毒性，可能会对细胞的存活和功能产生负面影响。  

DMSO作用原理  

1  

减少冰晶形成：DMSO能够降低水的冰点，减少冰晶在细胞内外的形成，从而保护细胞膜和内部结构。  

2  

保护细胞膜：DMSO能够渗透细胞膜，防止冷冻过程中膜的破裂和损伤。  

然而，DMSO的高渗透性也带来了毒性问题。在复苏过程中，以下机制可能导致DMSO对细胞产生毒性作用：  

01  

膜破坏：在高浓度下，DMSO会对细胞膜产生破坏作用，导致膜的通透性增加，细胞内外环境失衡。  

02  

蛋白质变性：DMSO可能与细胞内的蛋白质结合，导致蛋白质变性和功能丧失。  

03  

氧化应激：DMSO在一定条件下会产生自由基，导致细胞氧化应激反应，损伤细胞结构和功能。  

避开DMSO的影响，提高细胞复苏策略  

1  

迅速解冻：复苏时应迅速将细胞从液氮中取出，并在37℃水浴中迅速解冻。这有助于减少冰晶对细胞的损伤。  

2  

及时去除冷冻保护剂：解冻后应尽快将细胞进行离心，去除DMSO等冷冻保护剂，并用新鲜培养基重悬细胞，减少毒性作用。  

3  

使用优化的冷冻和复苏方案：优化冷冻保护剂的浓度和冷冻速率，确保细胞在冷冻和复苏过程中的最大存活率。常见的方案包括逐步降温和逐步复温，避免细胞受到剧烈的温度变化  

4  

添加抗凋亡和生长因子：在复苏后的培养基中添加抗凋亡试剂（如Z-VAD-FMK）或生长因子（如bFGF），有助于减少细胞凋亡，提高细胞存活率。  

5  

温和处理：复苏过程中应轻柔操作，避免机械损伤细胞。使用涂层（如胶原、纤连蛋白）增强细胞贴壁能力，促进细胞恢复正常形态和功能。  

可喜的是，天津灏洋生物技术公司正式推出了全新的无DMSO冻存液，这一创新产品专门针对间充质干细胞细胞，能在冷冻和解冻过程中保持细胞完整性和功能，同时还显著降低了对细胞的毒性风险。该产品已经取得医疗器械备案证书。欢迎您联系我们的客服，来了解该产品的详细信息及购买。